Ανάπτυξη μιας έμμεσης μεθόδου ELISA για την ανίχνευση αντισώματος κορωνοϊού IgG με σύνδρομο οξείας διάρροιας χοίρου με βάση ανασυνδυασμένη πρωτεΐνη ακίδας

Το σύνδρομο οξείας διάρροιας των χοίρων Ο κορωνοϊός (SADS-CoV) είναι ένας νέος εντερικός παθογόνος κορωνοϊός χοίρων που μπορεί να προκαλέσει υδαρή διάρροια σε νεογέννητα χοιρίδια και να προκαλέσει σημαντικές οικονομικές απώλειες στη βιομηχανία χοίρων.Προς το παρόν, δεν υπάρχει κατάλληλη ορολογική μέθοδος για την αξιολόγηση της αποτελεσματικότητας της λοίμωξης SADS-CoV και του εμβολίου, επομένως υπάρχει επείγουσα ανάγκη χρήσης μιας αποτελεσματικής ενζυμικής ανοσοπροσροφητικής δοκιμασίας (ELISA) για να καλυφθεί αυτή η ανεπάρκεια.Εδώ, κατασκευάστηκε ένα ανασυνδυασμένο πλασμίδιο που εκφράζει πρωτεΐνη ακίδας SADS-CoV (S) συντηγμένο με το πεδίο ανθρώπινης IgG Fc για να παράγει ανασυνδυασμένο βακουλοϊό και εκφράστηκε σε κύτταρα HEK 293F.Η πρωτεΐνη S-Fc καθαρίζεται με ρητίνη πρωτεΐνης G και διατηρεί την αντιδραστικότητα με αντισώματα κατά του ανθρώπινου Fc και αντι-SADS-CoV.Στη συνέχεια, η πρωτεΐνη S-Fc χρησιμοποιήθηκε για την ανάπτυξη έμμεσης ELISA (S-iELISA) και τη βελτιστοποίηση των συνθηκών αντίδρασης του S-iELISA.Ως αποτέλεσμα, αναλύοντας την τιμή OD450nm των 40 αρνητικών ορών SADS-CoV που επιβεβαιώθηκαν με δοκιμασία ανοσοφθορισμού (IFA) και στύπωμα Western, η τιμή αποκοπής προσδιορίστηκε ότι είναι 0,3711.Ο συντελεστής διακύμανσης (CV) των 6 θετικών ορών SADS-CoV εντός και μεταξύ των σειρών του S-iELISA ήταν όλοι μικρότεροι από 10%.Η δοκιμή διασταυρούμενης αντιδραστικότητας έδειξε ότι το S-iELISA δεν έχει διασταυρούμενη αντιδραστικότητα με άλλους ορούς ιού χοίρων.Επιπλέον, με βάση την ανίχνευση 111 κλινικών δειγμάτων ορού, το συνολικό ποσοστό σύμπτωσης IFA και S-iELISA ήταν 97,3%.Η δοκιμή εξουδετέρωσης ιού με 7 διαφορετικές τιμές OD450nm ορού έδειξε ότι η τιμή OD450nm που ανιχνεύθηκε από το S-iELISA συσχετίστηκε θετικά με τη δοκιμή εξουδετέρωσης του ιού.Τέλος, πραγματοποιήθηκε S-iELISA σε 300 δείγματα ορού χοιροτροφίας.Τα εμπορικά κιτ άλλων εντεροϊών χοίρων έδειξαν ότι τα θετικά ποσοστά IgG των SADS-CoV, TGEV, PDCoV και PEDV ήταν 81,7%, 54% και 65,3% αντίστοιχα., 6%, αντίστοιχα.Τα αποτελέσματα δείχνουν ότι το S-iELISA είναι ειδικό, ευαίσθητο και αναπαραγώγιμο και μπορεί να χρησιμοποιηθεί για την ανίχνευση μόλυνσης από SADS-CoV στη βιομηχανία χοίρων.Αυτό το άρθρο προστατεύεται από πνευματικά δικαιώματα.Όλα τα δικαιώματα διατηρούνται.