Κλινικά και μοριακά χαρακτηριστικά του ανθεκτικού στην καρβαπενέμη Hypervi

Η Javascript είναι απενεργοποιημένη αυτήν τη στιγμή στο πρόγραμμα περιήγησής σας.Όταν η Javascript είναι απενεργοποιημένη, ορισμένες λειτουργίες αυτού του ιστότοπου δεν θα λειτουργούν.
Καταχωρίστε τα συγκεκριμένα στοιχεία σας και τα συγκεκριμένα φάρμακα που σας ενδιαφέρουν και θα αντιστοιχίσουμε τις πληροφορίες που παρέχετε με άρθρα στην εκτενή βάση δεδομένων μας και θα σας στείλουμε έγκαιρα ένα αντίγραφο PDF μέσω email.
Κλινικά και μοριακά χαρακτηριστικά της ανθεκτικής στην καρβαπενέμη υψηλής μολυσματικότητας Klebsiella pneumoniae σε τριτοβάθμιο νοσοκομείο στη Σαγκάη
Zhou Cong, 1 Wu Qiang, 1 He Leqi, 1 Zhang Hui, 1 Xu Maosuo, 1 Bao Yuyuan, 2 Jin Zhi, 3 Fang Shen 11 Department of Clinical Laboratory Medicine, Shanghai Fifth People's Hospital, Fudan University, Σαγκάη, Λαϊκή Δημοκρατία της Κίνα;2 Τμήμα Εργαστηριακής Ιατρικής της Σαγκάης Jiaotong, Νοσοκομείο Παίδων της Σαγκάης, Σαγκάη, Λαϊκή Δημοκρατία της Κίνας.3 Department of Neurology, Shanghai Fifth People's Hospital, Fudan University Αντίστοιχος συγγραφέας: Fang Shen, Department of Clinical Laboratory Medicine, Shanghai Fifth People's Hospital, Fudan University, No. 128 Ruili Road, Minhang District, Shanghai, Τ.Κ. Email [email protected] Ιστορικό: Η συγχώνευση της αντοχής στην καρβαπενέμη και της υπερμολυσματικότητας στην Klebsiella pneumoniae έχει οδηγήσει σε μεγάλες προκλήσεις για τη δημόσια υγεία.Τα τελευταία χρόνια, υπάρχουν ολοένα και περισσότερες αναφορές για ανθεκτικά στην καρβαπενέμη απομονώσεις υψηλής μολυσματικότητας Klebsiella pneumoniae (CR-hvKP).Υλικά και μέθοδοι: Αναδρομική ανάλυση της αξιολόγησης κλινικών δεδομένων ασθενών που είχαν μολυνθεί με CR-hvKP από τον Ιανουάριο του 2019 έως τον Δεκέμβριο του 2020 σε τριτοβάθμιο νοσοκομείο.Υπολογίστε την Klebsiella pneumoniae, Klebsiella pneumoniae (hmKP), την ανθεκτική στην καρβαπενέμη Klebsiella pneumoniae (CR-hmKP) και την ανθεκτική στην καρβαπενέμη υψηλής λοιμογόνου πνευμονία που συλλέχθηκαν εντός 2 ετών Ο αριθμός των απομονώσεων του Leberella (CR-).Ανίχνευση PCR γονιδίων αντίστασης, γονιδίων που σχετίζονται με τη λοιμογόνο δράση, γονιδίων ορότυπου κάψας και τυποποίησης αλληλουχίας πολλαπλών τόπων (MLST) απομονώσεων CR-hvKP.Αποτελέσματα: Συνολικά 1081 μη επαναλαμβανόμενα στελέχη Klebsiella pneumoniae απομονώθηκαν κατά τη διάρκεια της μελέτης., Συμπεριλαμβανομένων 392 στελεχών Klebsiella pneumoniae (36,3%), 39 στελεχών CR-hmKP (3,6%) και 16 στελεχών CR-hvKP (1,5%).Περίπου το 31,2% (5/16) του CR-hvKP θα απομονωθεί το 2019 και περίπου το 68,8% (11/16) του CR-hvKP θα απομονωθεί το 2020. Μεταξύ των 16 στελεχών CR-hvKP, 13 στελέχη είναι ST ορότυπος Κ64, 1 στέλεχος είναι ορότυποι ST11 και Κ47, 1 στέλεχος είναι ορότυποι ST23 και Κ1 και 1 στέλεχος είναι ορότυποι ST86 και Κ2.Τα σχετιζόμενα με τη μολυσματικότητα γονίδια entB, fimH, rmpA2, iutA και iucA υπάρχουν και στις 16 απομονώσεις CR-hvKP, ακολουθούμενα από mrkD (n=14), rmpA (n=13), αεροβακτίνη (n=2) , AllS ( n=1).Οι 16 απομονώσεις CR-hvKP φέρουν όλες το γονίδιο καρβαπενεμάσης blaKPC-2 και το γονίδιο β-λακταμάσης εκτεταμένου φάσματος blaSHV.Τα αποτελέσματα της λήψης δακτυλικών αποτυπωμάτων DNA ERIC-PCR έδειξαν ότι 16 στελέχη CR-hvKP ήταν εξαιρετικά πολυμορφικά και οι ζώνες κάθε στελέχους ήταν σημαντικά διαφορετικές, δείχνοντας μια σποραδική κατάσταση.Συμπέρασμα: Αν και το CR-hvKP διανέμεται σποραδικά, αυξάνεται χρόνο με το χρόνο.έτος.Ως εκ τούτου, θα πρέπει να αφυπνιστεί η κλινική προσοχή και θα πρέπει να ληφθούν τα απαραίτητα μέτρα για την αποφυγή της κλωνοποίησης και της εξάπλωσης του υπερμικροβίου CR-hvKP.Λέξεις κλειδιά: Klebsiella pneumoniae, αντοχή στην καρβαπενέμη, υψηλή λοιμογόνος δράση, υψηλή βλέννα, επιδημιολογία
Η Klebsiella pneumoniae είναι ένα ευκαιριακό παθογόνο που μπορεί να προκαλέσει μια ποικιλία λοιμώξεων, όπως πνευμονία, λοιμώξεις του ουροποιητικού συστήματος, βακτηριαιμία και μηνιγγίτιδα.1 Τα τελευταία τριάντα χρόνια, σε αντίθεση με την κλασική Klebsiella pneumoniae (cKP), μια νέα εξαιρετικά λοιμογόνος υπερβλεννογόνος βλέννα Klebsiella pneumoniae (hvKP) έχει γίνει ένα κλινικά σημαντικό παθογόνο, το οποίο μπορεί να βρεθεί σε εξαιρετικά επιθετικές λοιμώξεις όπως τα ηπατικά αποστήματα που προκαλούνται σε υγιείς και ανοσοκατεσταλμένα άτομα.2 Αξίζει να σημειωθεί ότι αυτές οι λοιμώξεις συνήθως συνοδεύονται από καταστροφικές διάχυτες λοιμώξεις, συμπεριλαμβανομένης της ενδοφθαλμίτιδας και της μηνιγγίτιδας.3 Η παραγωγή φαινοτύπου hvKP υψηλού βλεννογόνου βλεννογόνου οφείλεται συνήθως στην αυξημένη παραγωγή καψικών πολυσακχαριτών και στην παρουσία ειδικών γονιδίων λοιμογόνου δράσης, όπως rmpA και rmpA2.4.Ο υψηλός φαινότυπος βλέννας καθορίζεται συνήθως από τη «δοκιμή χορδών».Οι αποικίες Klebsiella pneumoniae που αναπτύχθηκαν κατά τη διάρκεια της νύχτας σε πλάκες με άγαρ αίματος τεντώνονται με έναν βρόχο.Όταν σχηματίζεται ένα παχύρρευστο σχοινί μήκους >5 mm, η «δοκιμή σχοινιού» είναι θετική.5 Μια πρόσφατη μελέτη έδειξε ότι τα peg-344, iroB, iucA, rmpA rmpA2 και rmpA2 είναι βιοδείκτες που μπορούν να προσδιορίσουν με ακρίβεια το hvkp.6 Σε αυτή τη μελέτη, η εξαιρετικά λοιμογόνος ουσία Klebsiella pneumoniae ορίστηκε ότι έχει έναν ιδιαίτερα ιξώδη φαινότυπο βλέννας (θετικό αποτέλεσμα δοκιμής χορδής) και φέρει θέσεις που σχετίζονται με το πλασμίδιο λοιμογόνου δράσης Klebsiella pneumoniae (rmpA2, iutA, iucA) Στις πρώτες αναφορές της κοινότητας της δεκαετίας του 1980, περιγράφηκε η Tawan's πρώτη περίπτωση. -επίκτητα ηπατικά αποστήματα που προκαλούνται από hvKP, που συνοδεύονται από σοβαρή βλάβη των τελικών οργάνων, όπως μηνιγγίτιδα και ενδοφθαλμίτιδα.Το 7,8 hvKP έχει σποραδική μετάδοση σε πολλές χώρες στην Ασία, την Ευρώπη και την Αμερική.Αν και έχουν αναφερθεί αρκετά κρούσματα hvKP στην Ευρώπη και την Αμερική, ο επιπολασμός της hvKP εμφανίστηκε κυρίως σε ασιατικές χώρες, ιδιαίτερα στην Κίνα.9
Γενικά, η hvKP είναι πιο ευαίσθητη στα αντιβιοτικά, ενώ η ανθεκτική στην καρβαπενέμη πνευμονία Klebsiella (CRKP) είναι λιγότερο τοξική.Ωστόσο, με την εξάπλωση της αντοχής στα φάρμακα και των πλασμιδίων λοιμογόνου δράσης, το CR-hvKP περιγράφηκε για πρώτη φορά από τους Zhang et al.το 2015, και υπάρχουν όλο και περισσότερες εγχώριες αναφορές.10 Δεδομένου ότι το CR-hvKP μπορεί να προκαλέσει σοβαρές και δύσκολες στη θεραπεία λοιμώξεις, εάν εμφανιστεί ένας πανδημικός κλώνος, μπορεί να γίνει το επόμενο «υπερβακτηρίδιο».Μέχρι σήμερα, οι περισσότερες λοιμώξεις που προκαλούνται από CR-hvKP έχουν εμφανιστεί σε σποραδικά περιστατικά και οι εστίες μικρής κλίμακας είναι σπάνιες.11,12
Επί του παρόντος, το ποσοστό ανίχνευσης του CR-hvKP είναι χαμηλό και υπάρχουν λίγες σχετικές μελέτες.Η μοριακή επιδημιολογία του CR-hvKP είναι διαφορετική σε διαφορετικές περιοχές, επομένως είναι απαραίτητο να μελετηθεί η κλινική κατανομή και τα μοριακά επιδημιολογικά χαρακτηριστικά του CR-hvKP σε αυτήν την περιοχή.Αυτή η μελέτη ανέλυσε διεξοδικά τα γονίδια ανθεκτικότητας, τα γονίδια που σχετίζονται με τη λοιμογόνο δράση και το MLST του CR-hvKP.Προσπαθήσαμε να διερευνήσουμε τον επιπολασμό και τη μοριακή επιδημιολογία του CR-hvKP σε ένα τριτοβάθμιο νοσοκομείο στη Σαγκάη, στην ανατολική Κίνα.Αυτή η μελέτη έχει μεγάλη σημασία για την κατανόηση της μοριακής επιδημιολογίας του CR-hvKP στη Σαγκάη.
Τα μη επαναλαμβανόμενα στελέχη Klebsiella pneumoniae από το Πέμπτο Λαϊκό Νοσοκομείο της Σαγκάης που υπάγεται στο Πανεπιστήμιο Fudan από τον Ιανουάριο του 2019 έως τον Δεκέμβριο του 2020 συλλέχθηκαν αναδρομικά και υπολογίστηκαν τα ποσοστά των hmKP, CRKP, CR-hmkp και CR-hvKP.Όλα τα απομονωμένα στελέχη ταυτοποιήθηκαν από τον συμπαγή αυτόματο μικροβιακό αναλυτή VITEK-2 (Biomerieux, Marcy L'Etoile, Γαλλία).Χρησιμοποιήθηκε φασματομετρία μάζας Maldi-Tof (Bruker Daltonics, Billerica, ΜΑ, ΗΠΑ) για να επανελεγχθεί η ταυτοποίηση βακτηριακών στελεχών.Ο υψηλός φαινότυπος βλέννας προσδιορίζεται από τη «δοκιμή χορδών».Όταν η ιμιπενέμη ή η μεροπενέμη είναι ανθεκτικά, η αντοχή στην καρβαπενέμη προσδιορίζεται μέσω μιας δοκιμής ευαισθησίας στα φάρμακα.Η εξαιρετικά μολυσματική Klebsiella pneumoniae ορίζεται ότι έχει υψηλό φαινότυπο βλέννας (θετικό αποτέλεσμα δοκιμής χορδής) και φέρει θέσεις που σχετίζονται με το πλασμίδιο λοιμογόνου δράσης Klebsiella pneumoniae (rmpA2, iutA, iucA)6.
Μία μεμονωμένη αποικία Klebsiella pneumoniae εμβολιάστηκε σε πλάκα άγαρ αίματος προβάτου 5%.Μετά από επώαση όλη τη νύχτα στους 37°C, τραβήξτε απαλά προς τα πάνω την αποικία με έναν βρόχο εμβολιασμού και επαναλάβετε 3 φορές.Εάν μια παχύρρευστη γραμμή σχηματιστεί τρεις φορές και το μήκος είναι μεγαλύτερο από 5 mm, η "δοκιμή γραμμής" θεωρείται θετική και το στέλεχος έχει υψηλό φαινότυπο βλέννας.
Στον συμπαγή αυτόματο μικροβιακό αναλυτή VITEK-2 (Biomerieux, Marcy L'Etoile, Γαλλία), η αντιμικροβιακή ευαισθησία σε αρκετά κοινά χρησιμοποιούμενα αντιβιοτικά ανιχνεύθηκε με μικρο-αραίωση ζωμού.Τα αποτελέσματα ερμηνεύονται σύμφωνα με το έγγραφο καθοδήγησης που αναπτύχθηκε από το Ινστιτούτο Κλινικών και Εργαστηριακών Προτύπων (CLSI, 2019).Ε. coli ATCC 25922 και Klebsiella pneumoniae ATCC 700603 χρησιμοποιήθηκαν ως έλεγχοι για τη δοκιμή αντιμικροβιακής ευαισθησίας.
Το γονιδιωματικό DNA όλων των προϊόντων απομόνωσης Klebsiella pneumoniae εκχυλίστηκε από το κιτ γονιδιωματικού DNA TIANamp Bacteria (Tiangen Biotech Co. Ltd., Πεκίνο, Κίνα).Γονίδια β-λακταμάσης εκτεταμένου φάσματος (blaCTX-M, blaSHV και blaTEM), γονίδια καρβαπενεμάσης (blaKPC, blaNDM, blaVIM, blaIMP και blaOXA-48) και 9 αντιπροσωπευτικά γονίδια που σχετίζονται με τη λοιμογόνο δράση, συμπεριλαμβανομένων των pLVPK πλασμιδοειδών ιστών, lociall ( , mrkD, entB, iutA, rmpA, rmpA2, iucA, και aerobactin) ενισχύθηκαν με PCR όπως περιγράφηκε προηγουμένως.13,14 γονίδια ειδικά για τον ορότυπο της κάψας (Κ1, Κ2, Κ5, Κ20, Κ54 και Κ57) ενισχύθηκαν με PCR όπως περιγράφεται παραπάνω.14 Εάν είναι αρνητικό, ενισχύστε και καθορίστε την αλληλουχία του τόπου wzi για να προσδιορίσετε τα γονίδια που είναι ειδικά για τον ορότυπο της κάψας.15 Οι εκκινητές που χρησιμοποιήθηκαν σε αυτή τη μελέτη παρατίθενται στον Πίνακα S1.Τα θετικά προϊόντα PCR αλληλουχήθηκαν από την πλατφόρμα προσδιορισμού αλληλουχίας NextSeq 500 (Illumina, San Diego, CA, USA).Συγκρίνετε τις αλληλουχίες νουκλεοτιδίων εκτελώντας το BLAST στον ιστότοπο του NCBI (http://blast.ncbi.nlm.nih.gov/Blast.cgi).
Η πληκτρολόγηση αλληλουχίας πολλαπλών θέσεων (MLST) πραγματοποιήθηκε όπως περιγράφεται στον ιστότοπο MLST του Ινστιτούτου Παστέρ (https://bigsdb.pasteur.fr/klebsiella/klebsiella.html).Τα επτά γονίδια housekeeping gapA, infB, mdh, pgi, phoE, rpoB και tonB ενισχύθηκαν με PCR και αλληλουχήθηκαν.Ο τύπος αλληλουχίας (ST) προσδιορίζεται συγκρίνοντας τα αποτελέσματα της αλληλουχίας με τη βάση δεδομένων MLST.
Αναλύθηκε η ομολογία της Klebsiella pneumoniae.Το γονιδιωματικό DNA της Klebsiella pneumoniae εκχυλίστηκε ως εκμαγείο και οι εκκινητές ERIC παρουσιάζονται στον Πίνακα S1.Η PCR ενισχύει το γονιδιωματικό DNA και δημιουργεί ένα δακτυλικό αποτύπωμα γονιδιωματικού DNA.16 προϊόντα PCR ανιχνεύθηκαν με ηλεκτροφόρηση γέλης αγαρόζης 2%.Τα αποτελέσματα δακτυλικών αποτυπωμάτων DNA ταυτοποιήθηκαν χρησιμοποιώντας την αναγνώριση ζώνης λογισμικού QuantityOne και πραγματοποιήθηκε γενετική ανάλυση χρησιμοποιώντας τη μέθοδο μη σταθμισμένης ζευγαρωμένης ομάδας (UPGMA) του αριθμητικού μέσου όρου.Τα στελέχη με ομοιότητα> 75% θεωρούνται ότι είναι του ίδιου γονότυπου και αυτά με ομοιότητα <75% θεωρούνται ως διαφορετικοί γονότυποι.
Χρησιμοποιήστε στατιστικό πακέτο λογισμικού SPSS για Windows 22.0 για την ανάλυση των δεδομένων.Τα δεδομένα περιγράφονται ως μέση ± τυπική απόκλιση (SD).Οι κατηγορικές μεταβλητές αξιολογήθηκαν με τεστ chi-square ή ακριβές τεστ Fisher.Όλες οι στατιστικές δοκιμές είναι 2-ουράς και μια τιμή P <0,05 θεωρείται στατιστικά σημαντική.
Το Πέμπτο Λαϊκό Νοσοκομείο της Σαγκάης που συνδέεται με το Πανεπιστήμιο Fudan συνέλεξε 1081 απομονώσεις Klebsiella pneumoniae από την 1η Ιανουαρίου 2019 έως τις 31 Δεκεμβρίου 2020 και απέκλεισε τα διπλά απομονωμένα στελέχη από τον ίδιο ασθενή.Μεταξύ αυτών, 392 στελέχη (36,3%) ήταν hmKP, 341 στελέχη (31,5%) ήταν CRKP, 39 στελέχη (3,6%) ήταν CR-hmKP και 16 στελέχη (1,5%) ήταν CR-hvKP.Αξίζει να σημειωθεί ότι το 33,3% (13/39) του CR-hmKP και το 31,2% (5/16) του CR-hvKP είναι του 2019, το 66,7% (26/39) του CR-hmKP και το 68,8% (11/16 ) Το CR-hvKP διαχωρίστηκε από το 2020. Από πτύελα (17 στελέχη), ούρα (12 στελέχη), υγρό παροχέτευσης (4 στελέχη), αίμα (2 στελέχη), πύον (2 στελέχη), χολή (1 απομόνωση) και υπεζωκοτική συλλογή (1 απομόνωση), αντίστοιχα.Δεκαέξι τύποι CR-hvKP ανακτήθηκαν από πτύελα (9 απομονώσεις), ούρα (5 απομονώσεις), αίμα (1 απομόνωση) και υπεζωκοτική συλλογή (1 απομόνωση).
Μέσω της ταυτοποίησης στελεχών, της δοκιμής ευαισθησίας στο φάρμακο, της δοκιμής χορδών και της ανίχνευσης γονιδίου που σχετίζεται με τη λοιμογόνο δύναμη, εξετάστηκαν 16 στελέχη CR-hvKP.Τα κλινικά χαρακτηριστικά των 16 ασθενών που μολύνθηκαν με απομονώσεις CR-hvKP συνοψίζονται στον Πίνακα 1. 13 από τους 16 ασθενείς (81,3%) ήταν άνδρες και όλοι οι ασθενείς ήταν μεγαλύτεροι από 62 ετών (μέση ηλικία: 83,1±10,5 έτη).Προέρχονταν από 8 θαλάμους και περισσότεροι από τους μισούς προέρχονταν από την κεντρική ΜΕΘ (9 περιστατικά).Στα βασικά νοσήματα περιλαμβάνονται η εγκεφαλοαγγειακή νόσος (75%, 12/16), η υπέρταση (50%, 8/16), η χρόνια αποφρακτική πνευμονοπάθεια (50%, 8/16) κ.λπ. Η επεμβατική χειρουργική περιλαμβάνει μηχανικό αερισμό (62,5%, 10/ 16), ουροποιητικός καθετήρας (37,5%, 6/16), γαστρικός σωλήνας (18,8%, 3/16), χειρουργική επέμβαση (12,5%, 2/16) και ενδοφλέβιος καθετήρας (6,3%, 1/16).Εννέα από τους 16 ασθενείς πέθαναν και 7 ασθενείς βελτιώθηκαν και πήραν εξιτήριο.
Οι 39 απομονώσεις CR-hmKP χωρίστηκαν σε δύο ομάδες ανάλογα με το μήκος της κολλώδους χορδής.Μεταξύ αυτών, 20 απομονώσεις CR-hmKP με μήκος ιξώδους χορδής ≤ 25 mm χωρίστηκαν σε μια ομάδα και 19 απομονώσεις CR-hmKP με μήκος ιξώδους χορδής > 25 mm χωρίστηκαν σε μια άλλη ομάδα.Η μέθοδος PCR ανιχνεύει το θετικό ποσοστό των γονιδίων που σχετίζονται με τη λοιμογόνο δράση rmpA, rmpA2, iutA και iucA.Τα θετικά ποσοστά των γονιδίων που σχετίζονται με τη λοιμογόνο δράση CR-hmKP στις δύο ομάδες φαίνονται στον Πίνακα 2. Δεν υπήρχε στατιστική διαφορά στο θετικό ποσοστό των γονιδίων που σχετίζονται με τη λοιμογόνο δράση CR-hmKP μεταξύ των δύο ομάδων.
Ο Πίνακας 3 παραθέτει τα λεπτομερή προφίλ μικροβιακής αντοχής των 16 φαρμάκων.16 απομονώσεις CR-hvKP έδειξαν ανθεκτικότητα σε πολλά φάρμακα.Όλα τα προϊόντα απομόνωσης υποβλήθηκαν σε αγωγή με αμπικιλλίνη, αμπικιλλίνη/σουλβακτάμη, κεφοπεραζόνη/σουλβακτάμη, πιπερακιλλίνη/ταζομπακτάμη, κεφαζολίνη, κεφουροξίμη, κεφταζιδίμη, κεφτριαξόνη, κεφεπίμη, κεφοξιτίνη, ιμιπενέμη και μεροπενέμη είναι ανθεκτικά.Η τριμεθοπρίμη-σουλφαμεθοξαζόλη είχε το χαμηλότερο ποσοστό αντοχής (43,8%), ακολουθούμενη από την αμικασίνη (62,5%), τη γενταμυκίνη (68,8%) και τη σιπροφλοξασίνη (87,5%).
Η κατανομή των γονιδίων που σχετίζονται με τη λοιμογόνο δράση, των γονιδίων της μικροβιακής αντοχής, των γονιδίων του ορότυπου της κάψας και του MLST των 16 απομονώσεων CR-hvKP φαίνεται στο Σχήμα 1. Τα αποτελέσματα της ηλεκτροφόρησης γέλης αγαρόζης ορισμένων γονιδίων που σχετίζονται με τη λοιμογόνο δράση, των γονιδίων μικροβιακής αντοχής και των γονιδίων ορότυπου της κάψας είναι φαίνεται στο σχήμα 1. Εικόνα 2. Η ανάλυση MLST δείχνει συνολικά 3 ST, το ST11 είναι το πιο κυρίαρχο ST (87,5%, 14/16), ακολουθούμενο από ST23 (6,25%, 1/16) και ST86 (6,25%, 1 /16).Σύμφωνα με τα αποτελέσματα της τυποποίησης wzi, εντοπίστηκαν 4 διαφορετικοί καψικοί ορότυποι (Εικόνα 1).Μεταξύ των 16 ανθεκτικών στην καρβαπενέμη απομονώσεων hvKP, το K64 είναι ο πιο κοινός ορότυπος (n=13), ακολουθούμενος από τους K1 (n=1), K2 (n=1) και K47 (n=1).Επιπλέον, το στέλεχος του καψικού ορότυπου Κ1 είναι ST23, το στέλεχος του καψικού ορότυπου Κ2 είναι το ST86 και τα υπόλοιπα 13 στελέχη του Κ64 και 1 στέλεχος του Κ47 είναι όλα ST11.Τα θετικά ποσοστά 9 γονιδίων λοιμογόνου δράσης σε 16 απομονώσεις CR-hvKP φαίνονται στο Σχήμα 1. Τα γονίδια που σχετίζονται με τη λοιμογόνο δράση entB, fimH, rmpA2, iutA και iucA υπάρχουν σε 16 στελέχη CR-hvKP, ακολουθούμενα από mrkD (n = 14), rmpA (n = 13), αεροβακτηρίνη (n = 2), AllS (n=1).Οι 16 απομονώσεις CR-hvKP φέρουν όλες το γονίδιο καρβαπενεμάσης blaKPC-2 και το γονίδιο β-λακταμάσης εκτεταμένου φάσματος blaSHV.16 απομονώσεις CR-hvKP δεν έφεραν γονίδια καρβαπενέμης blaNDM, blaVIM, blaIMP, blaOXA-48 και γονίδια β-λακταμάσης εκτεταμένου φάσματος blaTEM, ομάδα blaCTX-M-2 και ομάδα blaCTX-M-8.Μεταξύ των 16 στελεχών CR-hvKP, 5 στελέχη έφεραν την ομάδα blaCTX-M-1 γονιδίου β-λακταμάσης εκτεταμένου φάσματος και 6 στελέχη την ομάδα blaCTX-M-9 γονιδίου β-λακταμάσης εκτεταμένου φάσματος.
Σχήμα 1 Τα γονίδια που σχετίζονται με τη λοιμογόνο δράση, τα γονίδια μικροβιακής αντοχής, τα γονίδια ορότυπου της κάψας και το MLST 16 απομονώσεων CR-hvKP.
Σχήμα 2 Ηλεκτροφόρηση σε πήκτωμα αγαρόζης ορισμένων γονιδίων που σχετίζονται με τη λοιμογόνο δράση, γονιδίων αντιμικροβιακής αντοχής και γονιδίων ορότυπου κάψας.
Σημείωση: M, δείκτης DNA.1, blaKPC (893bp);2, entB (400bp);3, rmpA2 (609bp);4, rmpA (429bp);5, iucA (239bp);6, iutA (880bp);7, Aerobacterin (556bp);8, K1 (1283bp);9, K2 (641bp);10, όλα S (508bp);11, mrkD (340bp);12, fimH (609bp).
Η ERIC-PCR χρησιμοποιήθηκε για την ανάλυση της ομολογίας 16 απομονώσεων CR-hvKP.Μετά την ενίσχυση PCR και την ηλεκτροφόρηση γέλης αγαρόζης, υπάρχουν 3-9 θραύσματα DNA.Τα αποτελέσματα των δακτυλικών αποτυπωμάτων έδειξαν ότι 16 απομονώσεις CR-hvKP ήταν εξαιρετικά πολυμορφικά και υπήρχαν εμφανείς διαφορές μεταξύ των απομονώσεων (Εικόνα 3).
Τα τελευταία χρόνια, υπάρχουν όλο και περισσότερες αναφορές για απομονώσεις CR-hvKP.Η εμφάνιση απομονώσεων CR-hvKP αποτελεί σημαντική απειλή για τη δημόσια υγεία, επειδή μπορεί να προκαλέσουν σοβαρές, δύσκολες στη θεραπεία λοιμώξεις σε υγιή άτομα.Σε αυτή τη μελέτη, ο επιπολασμός και τα μοριακά επιδημιολογικά χαρακτηριστικά του CR-hvKP σε τριτοβάθμιο νοσοκομείο στη Σαγκάη από το 2019 έως το 2020 μελετήθηκαν για να αξιολογηθεί εάν υπάρχει κίνδυνος έκρηξης CR-hvKP και η τάση ανάπτυξής του σε αυτόν τον τομέα.Ταυτόχρονα, αυτή η μελέτη μπορεί να προσφέρει μια πιο ολοκληρωμένη αξιολόγηση της κλινικής μολυσματικότητας, η οποία έχει μεγάλη σημασία για την πρόληψη της περαιτέρω εξάπλωσης τέτοιων απομονώσεων.
Αυτή η μελέτη ανέλυσε αναδρομικά την κλινική κατανομή και την τάση του CR-hvKP από το 2019 έως το 2020. Από το 2019 έως το 2020, τα προϊόντα απομόνωσης CR-hvKP παρουσίασαν αυξητική τάση.Περίπου το 31,2% (5/16) του CR-hvKP απομονώθηκε το 2019 και το 68,8% (11/16) του CR-hvKP απομονώθηκε το 2020, κάτι που συνάδει με την ανοδική τάση του CR-hvKP που αναφέρεται στη βιβλιογραφία.Δεδομένου ότι οι Zhang et al.περιγράφηκε για πρώτη φορά το CR-hvKP το 2015,10 έχει αναφερθεί όλο και περισσότερη βιβλιογραφία CR-hvKP, 17-20 κυρίως στην περιοχή Ασίας-Ειρηνικού, ιδιαίτερα στην Κίνα.Το CR-hvKP είναι ένα σούπερ βακτήριο με σούπερ λοιμογόνο δράση και αντοχή σε πολλά φάρμακα.Είναι επιβλαβές για την υγεία των ανθρώπων και έχει υψηλό ποσοστό θνησιμότητας.Επομένως, θα πρέπει να δοθεί προσοχή και να ληφθούν μέτρα για την πρόληψη της εξάπλωσής του.
Η ανάλυση αντοχής στα αντιβιοτικά 16 απομονώσεων CR-hvKP έδειξε υψηλό ποσοστό αντοχής στα αντιβιοτικά.Όλα τα προϊόντα απομόνωσης υποβλήθηκαν σε αγωγή με αμπικιλλίνη, αμπικιλλίνη/σουλβακτάμη, κεφοπεραζόνη/σουλβακτάμη, πιπερακιλλίνη/ταζομπακτάμη, κεφαζολίνη, κεφουροξίμη, κεφταζιδίμη, κεφτριαξόνη, κεφεπίμη, κεφοξιτίνη, ιμιπενέμη και μεροπενέμη είναι ανθεκτικά.Η τριμεθοπρίμη-σουλφαμεθοξαζόλη είχε το χαμηλότερο ποσοστό αντοχής (43,8%), ακολουθούμενη από την αμικασίνη (62,5%), τη γενταμυκίνη (68,8%) και τη σιπροφλοξασίνη (87,5%).Το ποσοστό αντίστασης του CR-hmkp που μελετήθηκε από τον Lingling Zhan και άλλους είναι παρόμοιο με αυτήν τη μελέτη [12].Οι ασθενείς που έχουν μολυνθεί με CR-hvKP έχουν πολλές βασικές ασθένειες, χαμηλή ανοσία και ασθενή ανεξάρτητη ικανότητα στείρωσης.Επομένως, η έγκαιρη θεραπεία με βάση τα αποτελέσματα του τεστ αντιμικροβιακής ευαισθησίας είναι πολύ σημαντική.Εάν είναι απαραίτητο, το μολυσμένο σημείο μπορεί να βρεθεί και να αντιμετωπιστεί με παροχέτευση, καθαρισμό και άλλες μεθόδους.
Οι 39 απομονώσεις CR-hmKP χωρίστηκαν σε δύο ομάδες ανάλογα με το μήκος της κολλώδους χορδής.Μεταξύ αυτών, 20 απομονώσεις CR-hmKP με μήκος ιξώδους χορδής ≤ 25 mm χωρίστηκαν σε μια ομάδα και 19 απομονώσεις CR-hmKP με μήκος ιξώδους χορδής > 25 mm χωρίστηκαν σε μια άλλη ομάδα.Συγκρίνοντας τα θετικά ποσοστά των γονιδίων που σχετίζονται με τη μολυσματικότητα CR-hmKP μεταξύ των δύο ομάδων, δεν υπήρξε στατιστικά σημαντική διαφορά στα θετικά ποσοστά γονιδίων μολυσματικότητας μεταξύ των δύο ομάδων.Έρευνα των Lin Ze et al.έδειξε ότι το θετικό ποσοστό μολυσματικών γονιδίων της Klebsiella pneumoniae ήταν σημαντικά υψηλότερο από αυτό της κλασικής Klebsiella pneumoniae.21 Ωστόσο, παραμένει ασαφές εάν το θετικό ποσοστό των γονιδίων λοιμογόνου δράσης συσχετίζεται θετικά με το μήκος της κολλητικής αλυσίδας.Άλλες μελέτες έχουν δείξει ότι η κλασική Klebsiella pneumoniae μπορεί επίσης να είναι μια εξαιρετικά μολυσματική Klebsiella pneumoniae, με υψηλότερο θετικό ποσοστό γονιδίων λοιμογόνου δράσης.22 Αυτή η μελέτη διαπίστωσε ότι το θετικό ποσοστό γονιδίου λοιμογόνου δράσης του CR-hmKP δεν συσχετίζεται θετικά με το μήκος της βλέννας.String (ή δεν αυξάνεται με το μήκος της κολλώδους χορδής).
Τα δακτυλικά αποτυπώματα ERIC PCR αυτής της μελέτης είναι πολυμορφικά και δεν υπάρχει κλινική διασταύρωση μεταξύ των ασθενών, επομένως 16 ασθενείς με λοίμωξη CR-hvKP είναι σποραδικές περιπτώσεις.Στο παρελθόν, οι περισσότερες λοιμώξεις που προκαλούνται από CR-hvKP έχουν αναφερθεί ως μεμονωμένα ή σποραδικά περιστατικά, 23,24 και μικρής κλίμακας εστίες CR-hvKP είναι σπάνιες στη βιβλιογραφία.11,25 Το ST11 είναι το πιο κοινό ST11 σε απομονώσεις CRKP και CR-hvKP στην Κίνα.26,27 Παρόλο που το ST11 CR-hvKP αντιπροσώπευε το 87,5% (14/16) των 16 απομονώσεων CR-hvKP σε αυτή τη μελέτη, δεν μπορεί να θεωρηθεί ότι τα 14 στελέχη ST11 CR-hvKP προέρχονται από τον ίδιο κλώνο, επομένως το δακτυλικό αποτύπωμα ERIC PCR απαιτείται.Ανάλυση ομολογίας.
Σε αυτή τη μελέτη, και οι 16 ασθενείς που μολύνθηκαν με CR-hvKP υποβλήθηκαν σε επεμβατική χειρουργική επέμβαση.Σύμφωνα με αναφορές, το θανατηφόρο ξέσπασμα πνευμονίας που σχετίζεται με τον αναπνευστήρα που προκαλείται από το CR-hvKP11 δείχνει ότι οι επεμβατικές διαδικασίες μπορεί να αυξήσουν τον κίνδυνο μόλυνσης από CR-hvKP.Παράλληλα, 16 ασθενείς που έχουν προσβληθεί από CR-hvKP έχουν υποκείμενα νοσήματα, εκ των οποίων τα εγκεφαλοαγγειακά νοσήματα είναι τα πιο συχνά.Μια προηγούμενη μελέτη έδειξε ότι η εγκεφαλοαγγειακή νόσος είναι ένας σημαντικός ανεξάρτητος παράγοντας κινδύνου για μόλυνση από CR-hvKP.28 Ο λόγος για αυτό το φαινόμενο μπορεί να είναι η εξασθενημένη ανοσία των ασθενών με εγκεφαλοαγγειακή νόσο, τα παθογόνα βακτήρια δεν μπορούν να αποκλειστούν ανεξάρτητα και μόνο η βακτηριοκτόνος δράση τους βασίζεται.Τα αντιβιοτικά θα οδηγήσουν σε συνδυασμό ανθεκτικότητας σε πολλά φάρμακα και υπερμολυσματικότητας μακροπρόθεσμα.Από τους 16 ασθενείς, οι 9 πέθαναν και το ποσοστό θνησιμότητας ήταν 56,3% (9/16).Το ποσοστό θνησιμότητας είναι υψηλότερο από 10,12 σε προηγούμενες μελέτες και χαμηλότερο από 11,21 που αναφέρθηκαν σε προηγούμενες μελέτες.Η μέση ηλικία των 16 ασθενών ήταν 83,1±10,5 έτη, υποδεικνύοντας ότι οι ηλικιωμένοι είναι πιο ευαίσθητοι στην CR-hvKP.Προηγούμενες μελέτες έχουν δείξει ότι οι νέοι είναι πιο επιρρεπείς στη μόλυνση.Η μολυσματικότητα της Klebsiella pneumoniae.29 Ωστόσο, άλλες μελέτες έχουν δείξει ότι οι ηλικιωμένοι είναι επιρρεπείς στην εξαιρετικά λοιμώδη Klebsiella pneumoniae24,28.Αυτή η μελέτη συνάδει με αυτό.
Μεταξύ των 16 στελεχών CR-hvKP, εκτός από ένα ST23 CR-hvKP και ένα ST86 CR-hvKP, τα άλλα 14 στελέχη είναι όλα ST11 CR-hvKP.Ο καψικός ορότυπος που αντιστοιχεί στο ST23 CR-hvKP είναι ο Κ1 και ο αντίστοιχος καψικός ορότυπος του ST86 CR-HVKP είναι ο Κ2, παρόμοιος με προηγούμενες μελέτες.30-32 Ασθενείς που είχαν μολυνθεί με ST23 (K1) CR-hvKP ή ST86 (K2) CR-hvKP πέθαναν και το ποσοστό θνησιμότητας (100%) ήταν σημαντικά υψηλότερο από αυτό των ασθενών που είχαν μολυνθεί με ST11 CR-hvKP (50%).Όπως φαίνεται στο Σχήμα 1, το θετικό ποσοστό των στελεχών ST23 (K1) ή ST86 (K2) των γονιδίων που σχετίζονται με τη λοιμογόνο δράση είναι υψηλότερο από αυτό των στελεχών ST11 (K64).Η θνησιμότητα μπορεί να σχετίζεται με το θετικό ποσοστό των γονιδίων που σχετίζονται με τη λοιμογόνο δράση.Σε αυτή τη μελέτη, 16 στελέχη CR-hvKP φέρουν όλα το γονίδιο καρβαπενεμάσης blaKPC-2 και το γονίδιο β-λακταμάσης εκτεταμένου φάσματος blaSHV.Το blaKPC-2 είναι το πιο κοινό γονίδιο καρβαπενεμάσης στο CR-hvKP στην Κίνα.33 Στη μελέτη των Zhao et al., το 25blaSHV είναι το γονίδιο β-λακταμάσης εκτεταμένου φάσματος με το υψηλότερο θετικό ποσοστό.Τα γονίδια λοιμογόνου δράσης entB, fimH, rmpA2, iutA και iucA υπάρχουν και στις 16 απομονώσεις CR-hvKP, ακολουθούμενα από mrkD (n=14), rmpA (n=13), αναερόβικίνη (n=2), allS (n = 1), η οποία είναι παρόμοια με την προηγούμενη μελέτη.34 Ορισμένες μελέτες έχουν δείξει ότι τα rmpA και rmpA2 (διαμορφωτές των γονιδίων του φαινοτύπου της βλέννας) μπορούν να προάγουν την έκκριση καψικών πολυσακχαριτών, οδηγώντας σε υπερβλεννοειδείς φαινότυπους και αυξημένη λοιμογόνο δράση.35 Τα αεροβακτηρίδια κωδικοποιούνται από το γονίδιο iucABCD και οι ομόλογοι υποδοχείς τους κωδικοποιούνται από το γονίδιο iutA, επομένως έχουν υψηλότερο επίπεδο μολυσματικότητας στον προσδιορισμό μόλυνσης από G. mellonella.Το allS είναι ένας δείκτης του K1-ST23, όχι στο pLVPK, το pLVPK είναι ένα πλασμίδιο λοιμογόνου δράσης από τον υπερμολυσματικό τύπο K2.Το allS είναι ένας ενεργοποιητής μεταγραφής τύπου HTH.Αυτά τα μολυσματικά γονίδια είναι γνωστό ότι συμβάλλουν στη λοιμογόνο δράση και είναι υπεύθυνα για τον αποικισμό, την εισβολή και την παθογένεια.36
Αυτή η μελέτη περιγράφει τον επιπολασμό και τη μοριακή επιδημιολογία του CR-hvKP στη Σαγκάη της Κίνας.Αν και η μόλυνση που προκαλείται από το CR-hvKP είναι σποραδική, αυξάνεται χρόνο με το χρόνο.Τα αποτελέσματα υποστηρίζουν προηγούμενη έρευνα και δείχνουν ότι το ST11 CR-hvKP είναι το πιο δημοφιλές CR-hvKP στην Κίνα.Οι ST23 και ST86 CR-hvKP έδειξαν υψηλότερη μολυσματικότητα από το ST11 CR-hvKP, αν και είναι και οι δύο εξαιρετικά λοιμογόνοι Klebsiella pneumoniae.Καθώς αυξάνεται το ποσοστό της εξαιρετικά μολυσματικής Klebsiella pneumoniae, το ποσοστό αντοχής της Klebsiella pneumoniae μπορεί να μειωθεί, γεγονός που θα οδηγήσει σε τυφλή αισιοδοξία στην κλινική πράξη.Ως εκ τούτου, είναι απαραίτητο να μελετηθεί η λοιμογόνος δράση και η φαρμακευτική αντοχή της Klebsiella pneumoniae.
Αυτή η μελέτη εγκρίθηκε από την Επιτροπή Ιατρικής Δεοντολογίας του Πέμπτου Λαϊκού Νοσοκομείου της Σαγκάης (Αρ. 104, 2020).Τα κλινικά δείγματα αποτελούν μέρος των συνηθισμένων εργαστηριακών διαδικασιών του νοσοκομείου.
Ευχαριστούμε όλο το προσωπικό του Central Laboratory of Shanghai Fifth People's Hospital για την παροχή τεχνικής καθοδήγησης για αυτήν τη μελέτη.
Αυτή η εργασία υποστηρίχθηκε από το Ίδρυμα Φυσικών Επιστημών της Περιφέρειας Minhang, Σαγκάη (αριθμός έγκρισης: 2020MHZ039).
1. Navon-Venezia S, Kondratyeva K, Carattoli A. Klebsiella pneumoniae: η κύρια παγκόσμια πηγή και σαΐτα για την αντοχή στα αντιβιοτικά.FEMS Microbiology Αναθεωρημένη Έκδοση 2017;41(3): 252–275.doi:10.1093/femsre/fux013
2. Prokesch BC, TeKippe M, Kim J, κλπ. Πρωτοπαθής οστεομυελίτιδα που προκαλείται από υψηλή τοξικότητα.Το Lancet έχει μολυνθεί με Dis.2016; 16(9):e190–e195.doi:10.1016/S1473-3099(16)30021-4
3. Shon AS, Bajwa RPS, Russo TA.Υψηλή μολυσματικότητα (υπερβλέννα).Klebsiella pneumoniae λοιμογόνος δύναμη.2014;4(2): 107–118.doi:10.4161/viru.22718
4. Paczosa MK, Mecsas J. Klebsiella pneumoniae: Συνεχίστε την επίθεση με δυνατή άμυνα.Microbiol Mol Biol Rev. 2016;80(3):629–661.doi:10.1128/MMBR.00078-15
5. Fang C, Chuang Y, Shun C, et αϊ.Νέα μολυσματικά γονίδια της Klebsiella pneumoniae που προκαλούν πρωτογενές ηπατικό απόστημα και μεταστατικές επιπλοκές της σήψης.J Εχρ Med.2004;199(5):697–705.doi:10.1084/jem.20030857
6. Russo TA, Olson R, Fang CT, κ.λπ. Αναγνώριση του J Clin Microbiol, ενός βιοδείκτη που χρησιμοποιείται για τη διάκριση της εξαιρετικά μολυσματικής Klebsiella pneumoniae από την κλασική Klebsiella pneumoniae.2018; 56(9):e00776.
7. YCL, Cheng DL, Lin CL.Ηπατικό απόστημα Klebsiella pneumoniae που σχετίζεται με λοιμώδη ενδοφθαλμίτιδα.Arch ασκούμενος γιατρός.1986, 146(10):1913-1916.doi:10.1001/archinte.1986.00360220057011
8. Chiu C, Lin D, Liaw Y. Μεταστατική σηπτική ενδοφθαλμίτιδα σε πυώδες απόστημα ήπατος.J Κλινική Γαστρεντερολογία.1988, 10(5):524-527.doi:10.1097/00004836-198810000-00009
9. Guo Yan, Wang Shun, Zhan Li, κ.λπ. Μικροβιολογικά και κλινικά χαρακτηριστικά απομονώσεων υψηλής βλεννογόνου Klebsiella pneumoniae που σχετίζονται με διεισδυτικές λοιμώξεις στην Κίνα.Τα προ-κύτταρα μολύνονται με μικροοργανισμούς.2017; 7.
10. Zhang Yi, Zeng Jie, Liu Wei, κ.λπ. Η εμφάνιση ενός εξαιρετικά λοιμογόνου στελέχους Klebsiella pneumoniae ανθεκτικής στην καρβαπενέμη σε κλινικές λοιμώξεις στην Κίνα[J].λοίμωξη J.2015;71(5): 553–560.doi:10.1016/j.jinf.2015.07.010
11. Gu De, Dong Nan, Zheng Zhong, κ.λπ. Ένα θανατηφόρο ξέσπασμα υψηλής μολυσματικής πνευμονίας Klebsiella ανθεκτικής στην καρβαπενέμη ST11 σε ένα κινεζικό νοσοκομείο: μια μοριακή επιδημιολογική μελέτη.Το Lancet έχει μολυνθεί με Dis.2018; 18 (1): 37–46.doi:10.1016/S1473-3099(17)30489-9
12. Zhan Li, Wang S, Guo Yan, et al.Ένα ξέσπασμα του ανθεκτικού στην καρβαπενέμη στελέχους ST11 υπερβλεννοειδούς Klebsiella pneumoniae σε τριτοβάθμιο νοσοκομείο στην Κίνα.Τα προ-κύτταρα μολύνονται με μικροοργανισμούς.2017; 7.
13. FRE, Messai Y, Alouache S, κ.λπ. Μοντέλο λοιμογόνου φάσματος και ευαισθησίας στο φάρμακο Klebsiella pneumoniae που απομονώθηκε από διαφορετικά κλινικά δείγματα [J].Η παθοφυσιολογία.2013; 61 (5): 209-216.doi:10.1016/j.patbio.2012.10.004
14. Turton JF, Perry C, Elgohari S, κ.λπ. Χαρακτηρισμός PCR και τυποποίηση της Klebsiella pneumoniae χρησιμοποιώντας ειδικότητα τύπου κάψας, μεταβλητό αριθμό διαδοχικών επαναλήψεων και γονιδιακούς στόχους λοιμογόνου δράσης[J].J Med Microbiology.2010;59 (Κεφάλαιο 5): 541–547.doi:10.1099/jmm.0.015198-0
15. Brisse S, Passet V, Haugaard AB, κ.λπ. Αλληλουχία γονιδίου Wzi, μια ταχεία μέθοδος για τον προσδιορισμό του τύπου κάψουλας Klebsiella[J].J Κλινική Μικροβιολογία.2013, 51 (12): 4073-4078.doi:10.1128/JCM.01924-13
16. Ranjbar R, Tabatabaee A, Behzadi P, κ.λπ. Στελέχη E. coli που απομονώθηκαν από διαφορετικά δείγματα ζωικών κοπράνων, εντεροβακτήρια επαναλαμβανόμενου γονιδιακού τύπου συναινετική αλυσιδωτή αντίδραση πολυμεράσης (ERIC-PCR) γονότυπος[J].Ιράν J Pathol.2017;12(1): 25–34.doi:10.30699/ijp.2017.21506